DNA-topoisomeraasi on yleinen termi entsyymeille, jotka katalysoivat DNA-topoisomeerien keskinäistä konversiota. Se katalysoi DNA-juosteen katkeamisen ja sitoutumisen kytkentäreaktiota. Reaktiomekanismin analysoimiseksi in vitro käytetään substraattina pyöreää DNA:ta.
